Comments
Für den histochemischen Nachweis von Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase wird durch das Enzym NADPH oxidiert und NBT als Wasserstoffakzeptor reduziert. Dabei fällt farbiges, unlösliches Formazan an der Stelle der Enzymaktivität aus (1). Eine Stammlösung (50 mg/ml oder 75 mg/ml in 70%igem wässrigen DMF) wird zwischen -20°C und \+4°C bis zu einem Jahr gelagert (4). Bei einer völlig anderen Anwendung wurde mit NBT Fibrinogen aus kleinen Plasmamengen isoliert. Dazu wurden Plasma und NBT- Lösung (1 g/L) im Verhältnis 1 : 1 gemischt und 5-10 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Es entsteht ein Präzipitat, das je nach folgender Waschlösung hohe Ausbeuten an reinem Fibrinogen ergibt (2). Außerdem wird NBT in Kombination mit BCIP (siehe A1117) zum Nachweis von alkalischer Phosphatase verwendet. In dieser Reaktion wird Indoxyl mit NBT zum unlöslichen, blauen Indigo oxidiert (4).
Literature
(1) Negi, D.S. & Stephens, R.J. (1977) J. Histochem. Cytochem. 25, 149-154. Verbesserte Methode für die histochemische Lokalisation von Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase in tierischen und pflanzlichen Geweben. (2) Vila, V. et al. (1984) Clin. Chim. Acta 138, 215-219. Isolierung von menschlichem Fibrinogen mit NBT. (3) Lokuta, M.A. et al. (1997) BioTechniques 22, 841-844. Spektrophotometrische Bestimmung des oxidativen Metabolismus. (4) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Supplement 66, Seite 10.8.17. Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York. (5) Jekely, G. & Arendt, D. (2007) BioTechniques 42, 751-755. Konfokale Detektion von NBT/BCIP-Präzipitaten auf zellulärer Ebene.
