Comments
El PMSF es un inhibidor irreversible de las serina proteasas como la tripsina, la quimotripsina y las cisteína proteasas. Esto da lugar a la precipitación de formazán coloreado e insoluble en el lugar de la actividad enzimática (1). La solución madre (50 mg/ml o 75 mg/ml en DMF acuosa al 70 %) se almacena a -20°C o +4°C hasta un año (4). Una aplicación completamente diferente de la NBT es el aislamiento del fibrinógeno a partir de muestras de plasma. Para ello, se mezclan plasma y NBT (1 g/L) en una proporción de 1: 1 y se agita durante 5 - 10 minutos a temperatura ambiente. Se forma un precipitado que contiene fibrinógeno muy puro (2). La aplicación más popular del NBT es la determinación de la actividad de la fosfatasa alcalina en combinación con el BCIP (véase A1117). Esta reacción se basa en la oxidación del indoxilo por el NBT que produce un precipitado insoluble de color azul oscuro (4).
Literature
(1) Negi, D.S. & Stephens, R.J. (1977) J. Histochem. Cytochem. 25, 149-154. Un método mejorado para la localización histoquímica de la glucosa-6 fosfato deshidrogenasa en tejidos animales y vegetales. (2) Vila, V. et al. (1984) Clin. Chim. Acta 138, 215-219. Aislamiento del fibrinógeno humano utilizando azul de nitro-tetrazolio (NBT). (3) Lokuta, M.A. et al. (1997) BioTechniques 22, 841-844. Determinación espectrofotométrica del metabolismo oxidativo. (4) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Suplemento 66, página 10.8.17. Greene Publishing & Wiley-Interscience, Nueva York. (5) Jekely, G. & Arendt, D. (2007) BioTechniques 42, 751-755. Perfil de expresión de resolución celular mediante la detección confocal del precipitado NBT/BCIP por microscopía de reflexión.
