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El dietilo pirocarbonato (DEPC) modifica los residuos de histidina de las proteínas y provoca la inactivación de muchas enzimas. En biología molecular se utiliza principalmente como un inhibidor fuerte, pero no absoluto, de la actividad de la RNasa. Además, el DEPC reacciona con la adenosina de los ácidos nucleicos monocatenarios (2) y con las purinas del ADN-Z (4) y del ADN-B (5), respectivamente. Para el tratamiento del agua con DEPC, añadir 1 ml de DEPC a 1 litro de agua bidestilada (0,1 % DEPC v/v) y agitar durante la noche. La esterilización en autoclave a 20 psi durante 20 minutos inactiva el DEPC. El DEPC reacciona con el agua y se hidroliza en etanol y CO₂. Es de baja solubilidad en tampones acuosos (solubilidad en agua máx. 40 mM). El DEPC en su forma pura tiene una concentración de 6,9 M (3). Como diluyente se puede utilizar etanol anhidro o acetonitrilo (por ejemplo, solución madre 10 mM (3). La esterilización en autoclave inactiva totalmente el DEPC en las soluciones, aunque el olor típico no desaparezca (1). Dado que el DEPC acila los residuos de histidilo y tirosilo, no lo utilice en combinación con reactivos que contengan estos residuos (por ejemplo, Tris). El Tris inactiva el DEPC: Se sospecha que el DEPC es un carcinógeno y debe manipularse con mucho cuidado. No respirar los vapores y evitar el contacto con la piel. El DEPC puede dañar los ojos y las mucosas. La combinación con iones de amoníaco (por ejemplo, acetato de amonio de la precipitación de ácidos nucleicos) forma el fuerte carcinógeno etilcarbamato (2).
Literature
(1) Summers, W.C. (1970) Anal. Biochem. 33, 459-463. Un método sencillo para la extracción de ARN de E. coli con DEPC. (2) Berger, S.L. (1975) Anal. Biochem. 67, 428-437. DEPC: Un examen de sus propiedades en soluciones tamponadas con una nueva técnica de ensayo. (3) Ehrenberg, L. et al. (1976) Progr. Nucl. Acid Res. Mol. Biol. 16, 189-262. Dietil pirocarbonato en la investigación de ácidos nucleicos. (4) Miles, E.W. (1977) Methods Enzymol. 47, 431-442. Modificación de los residuos de histidilo en las proteínas mediante el pirocarbonato de dietilo. (5) Herr, W. (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82, 8009-8013. DEPC: Una sonda química para la estructura secundaria en ADN superenrollado negativamente. (6) McCarthy, J.G. et al. (1990) Biochemistry 29, 6071-6081. Reactividad química del DEPC con el ADN-B.
