Comments
Aprotinin wurde von zwei verschiedenen Arbeitsgruppen unabhängig voneinander beschrieben. Daher sind auch ursprünglich zwei Bezeichnungen vergeben worden: Bovine Pancreatic Trypsin Inhibitor (BPTI) und Trypsin-Kallikrein Inhibitor (TKI). Es ist ein sehr basisches, aus 58 Aminosäuren zusammengesetztes Protein (1, 2). Aprotinin hemmt Trypsin, verschiedene Chymotrypsine, Kallikrein verschiedenen Ursprungs und Plasmin. Als Protease-Inhibitor wird in der Regel mit einer Konzentration von 2 - 10 μg/ml (ca. 1 μM) gearbeitet. Die in Ref. 3 angegebene Arbeitskonzentration von 500 KIU/ml (ca. 10 μM) erscheint sehr hoch.Stabilität: Aprotinin kann in lyophylisierter Form bei \+4°C für unbegrenzte Zeit gelagert werden. In Salz- oder Pufferlösungen bei pH 5 - 8 ist Aprotinin mindestens einen Monat bei \+4°C oder mehrere Jahre bei -20°C stabil. Stammlösungen (z. B. 10 mg/ml) sollten in kleinen Aliquots eingefroren und nur einmal verwendet werden, damit sie nicht wiederholt eingefroren und aufgetaut werden. Unter diesen Bedingungen aggregiert das basische Polypeptid Aprotinin. Lösungen mit einem pH-Wert unter 4 und über 9 sollten sofort verbraucht werden. Direkter Kontakt mit Sonnenlicht, UV-Licht und reduzierenden Agentien soll vermieden werden. Aprotinin ist auch in Wasser, 70 % Methanol, 70 % Ethanol oder 50 % Aceton stabil (2, 3).Einheiten-Definition: Eine Trypsin-inhibitorische Einheit (TIU) hemmt die Aktivität von 2 Trypsin-Einheiten um 50 %, wobei eine Trypsin-Einheit 1 μmol Nα-Benzoyl-DL-arginin-p-nitroanilid (BAPNA) pro Minute bei pH 7,8 und 25°C hydrolysiert. Dabei entspricht 1 TIU (Trypsin-inhibitorische Einheit) ca. 1300 KIU (Kallikrein-inhibitorische Einheiten) und 1 TIU entspricht einer Ph. Eur.-Einheit.
Literature
(1) Kassell, B. & Laskowski, Sr., M. (1965) Biochem. Biophys. Res. Com. 20, 463-468. Der basische Trypsin-Inhibitor aus Rinderpankreas. (2) Kassell, B. (1970) Methods Enzymol. 19, 844-852. Der Trypsin-Kallikrein - Inhibitor aus dem Rind. (3) Fritz, H. & Wunderer, G. (1983) Drug Res. 33, 479-494. Biochemie und Anwendung von Aprotinin.
