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El XTT es una sal de tetrazolio, similar al MTT. Tras el tratamiento enzimático, se forma un formazán insoluble en agua. Mientras que el citotóxico MTT tiene que ser disuelto en DMSO, el XTT es soluble en agua y no es tóxico por sí mismo. Aunque el MTT es mejor metabolizado por muchas líneas celulares, el XTT es suficientemente reducido por las células en presencia de metosulfato de fenazina (PMS). El PMS no influye en el recambio del XTT. Dependiendo de la línea celular, las condiciones óptimas son 50 μg de XTT y 0,15 - 0,4 μg de PMS por pocillo de 96 placas (1). El XTT se utiliza, por ejemplo, para el cribado de fármacos contra el VIH (2), ensayos de citotoxicidad (3), cuantificación del TNF-α en bioensayos (4) o determinación del daño celular en hongos, por ejemplo, mediante antimicóticos (5). La albúmina sérica puede provocar un aumento de la señal en el ensayo XTT. Este efecto es dependiente de la concentración y se debe a un residuo de cisteína libre en la albúmina. El glutatión y la cisteína muestran efectos similares. La interferencia de la albúmina puede reducirse añadiendo N-etilmaleimida (6). Se recomienda preparar una solución madre en una solución acuosa (1 mg/ml), como por ejemplo PBS o un medio sin suero.
Literature
(1) Scudiero, D.A. et al. (1988) Cancer Res. 48, 4827-4833. Evaluación de un ensayo de Tetrazolio/Formazán soluble para el crecimiento celular y la sensibilidad a los fármacos en cultivo utilizando líneas celulares humanas y de otros tumores. (2) Weislow, O.S. et al. (1989) J. Natl. Cancer Inst. 81, 577-586. New soluble-Formazan assay for HIV-1 cytopathic effects: Aplicación al cribado de alto flujo de productos sintéticos y naturales para la actividad antiviral del SIDA. (3) Jost, L.M. et al. (1992) J. Immunol. Methods 147, 153-165. Ensayo colorimétrico mejorado de citotoxicidad celular a corto y largo plazo basado en el XTT para células de melanoma y otros tumores. (4) Nargi, F.E. & Yang, T.J. (1993) J. Immunol. Methods 159, 81-91. Optimización del bioensayo de células L-M para cuantificar el factor de necrosis tumoral a en suero y plasma. (5) Meshulam, T. et al. (1995) J. Infect. Dis. 172, 1153-1156. Un nuevo ensayo simplificado para la evaluación del daño celular por hongos con el colorante de tetrazolio XTT. (6) Funk, D. et al. (2007) BioTechniques 43, 178-186. La albúmina de suero conduce a resultados falsos positivos en el ensayo XTT y MTT.
