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El ARN o el ADN se desnaturalizan en geles de poliacrilamida con urea 7 M. Las moléculas con longitudes de cadena superiores a 150 - 200 nucleótidos no se desnaturalizan completamente a temperatura ambiente en urea 7 M, por lo que es necesario utilizar geles de poliacrilamida que contengan un 98% de formamida para dimensionar las moléculas más grandes. La separación de las proteínas según su tamaño y carga requiere una concentración de 6-8 M de urea en la sonda y en el gel de apilamiento y separación. A valores de pH alcalinos, la urea se descompone y forma iones de cianato. Estos iones pueden reaccionar con el grupo amino y formar derivados carbamilados estables con un patrón de migración modificado durante la electroforesis. Las soluciones que contengan urea no deben almacenarse durante períodos prolongados, no deben calentarse y los geles que contengan urea deben someterse a una prueba previa para eliminar los iones de cianato antes de cargar el gel.
Literature
(1) Maniatis, T. & Efstratiadis, A (1980) Methods Enzymol. 65, 299-305. Fraccionamiento de ADN o ARN de bajo peso molecular en geles de poliacrilamida que contienen 98% de formamida o 7 M de urea. (2) Soulié, S. et al. (1996) Anal. Biochem. 236, 363-364. La urea reduce la agregación de las proteínas de membrana durante el SDS-PAGE. (3) Lippincott, J. & Apostol. I. (1999) Anal. Biochem. 267, 57-64. Carbamilación de la cisteína en la hemoglobina por la urea.
