Comments
El medio TB final requiere suplementos adicionales: glicerina (4 ml/L) y una solución tampón de fosfato 10X (pH ~ 7,4, estéril, 100 ml/L). Instrucciones para preparar el medio líquido (1 litro): se disuelven 36 g de polvo en 900 ml de agua y se añaden 4 ml de glicerol (A1123) por litro de medio y se esteriliza en autoclave. Antes de la inoculación con bacterias, añada 100 ml de una solución tampón fosfato 10X estéril y un antibiótico, dependiendo del plásmido transformado. Precaución: los antibióticos y los suplementos nutricionales deben añadirse sólo después de que la solución se haya enfriado a 50°C o menos, ya que estos componentes suelen ser sensibles al calor. Para preparar una solución tampón de fosfato 10X, disuelva 23,1 g de potasio di-hidrógeno fosfato y 125,4 g de di-potasio hidrógeno fosfato en 1 L de agua y esterilice la solución. Precaución: Para evitar que se formen fosfatos insolubles (calcio y magnesio) y precipiten, hay que esterilizar los fosfatos por separado.
Literature
(1) Sambrook, J., Fritsch, E.F. & Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York. (2) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York.
