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La alta concentración de polifenoles en muchas plantas es un problema para aislar los ácidos nucleicos, ya que estas sustancias inhibirían las enzimas en pasos posteriores. Se pueden absorber añadiendo un 1 % de polivinilpirolidona K30 (v/v; concentración final) durante la homogeneización del tejido (ref. 1 página 2.3.4). Se recomienda preparar la solución madre (20 %) fresca cada vez (2). Las membranas de nylon con carga positiva utilizadas en los immunoblots muestran un alto fondo no específico. Por lo tanto, estas superficies deben ser bloqueadas, en el caso de la membrana de nylon de forma muy estricta. Puede utilizarse caseína (6 % p/v) en combinación con polivinilpirrolidona (PVP) al 1 % (v/v). Ambas sustancias se disuelven agitando durante 5 minutos en tampón TTBS caliente (65°C).
Literature
(1) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Página 2.3.4 (Supl. 27) y página 10.8.15 (Supl. 39). Greene Publishing & Wiley-Interscience, Nueva York. (2) John, M.E. (1992) Nucleic Acids Res. 20, 2381. Aislamiento de ARN y ADN de plantas con alto contenido en polifenoles.
