Comments
Un método comúnmente utilizado es la extracción con "tiocianato de guanidinio-fenol-cloroformo". No es imprescindible utilizar fenol o cloroformo si la extracción es para un northern blot o southern blot, ya que la electroforesis en gel seguida de la transferencia a una membrana separa el ARN/ADN de las proteínas. Dado que estos métodos (northern o southern blot) utilizan sondas de oligonucleótidos marcadas, los péptidos que consiguen pasar por el proceso no suelen ser motivo de preocupación, a menos que el péptido tenga actividad de RNasa o DNasa o y sólo si una enzima consigue renaturalizar, lo que no debería ocurrir si se siguen correctamente los protocolos adecuados. Una posible excepción puede surgir del trabajo con extremófilos hipertermófilos porque algunas enzimas de estos organismos pueden permanecer estables en circunstancias inusuales.
Literature
(1) Miller, H. (1987) Methods Enzymol. 152, 145-179. Aspectos prácticos sobre la preparación de ADN de fagos y plásmidos. (2) Dorin, M. & Bornecque, C.A. (1995) BioTechniques 18, 90-92. Separación rápida de ADN plasmídico por centrifugación de gradiente discontinuo. (3) Hildeman, D.A. & Muller, D. (1997) BioTechniques 22, 878-879. Mejora del rendimiento del ADN plasmídico mediante la eliminación del CsCl durante la precipitación con etanol.
