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La diacilhidrazida cíclica luminol es oxidada por el peróxido de hidrógeno, generando un radical luminol. Este radical forma un endoperóxido que se descompone para formar un anión 3-aminoftalato. Cuando esta molécula vuelve a su estado básico, se emite luz. La emisión de luz puede aumentar hasta 1000 veces con derivados del 6-hidroxibenzotiazol o fenoles sustituidos. Los potenciadores actúan como mediadores de la transferencia de electrones. La reacción de quimioluminiscencia con luminol puede realizarse en varios disolventes, como agua, DMSO, DMF, alcoholes inferiores, etc. El pH óptimo es de 9,0 o superior. Estas son siempre reacciones de oxidación. Como agentes oxidantes se utilizan principalmente hipoclorito, ferricianuro de potasio y persulfato (1). Varias reacciones enzimáticas, por ejemplo con dismutasa (2) o peroxidasas (3), se han desarrollado con la reacción del luminol y los radicales de oxígeno para emitir luz. Para el sistema de la peroxidasa, las concentraciones óptimas son 0,2 mM de luminol, 4 mM de 4-yodofenol y 17,6 mM de peróxido de hidrógeno (4). El límite de detección es muy inferior a un nanogramo de proteína. Para preparar una solución madre se pueden disolver 100 mg/ml de luminol en DMSO o 10 mM (1,7717 mg/ml) en 50% de DMSO. La solución de revelado contiene (Ref. 4) 0,5 mM de luminol, 4 mM de 4-yodofenol y 50 mM de tampón glicina-NaOH (pH 9,6) y puede almacenarse indefinidamente a temperatura ambiente protegida de la luz. El peróxido de hidrógeno (17,6 mM de concentración final) se añade justo antes de su uso. El reactivo puede utilizarse varias veces. Sólo hay que añadir de nuevo el peróxido de hidrógeno (4).
Literature
(1) Roswell, D.F. & White, E.H. (1978) Methods Enzymol. 57, 409-423. La quimioluminiscencia del luminol y las hidrazidas relacionadas. (2) Huu, T.P. et al. (1984) Anal. Biochem. 142, 467-472. Ensayo de luminol para la microdeterminación de la actividad de la superóxido dismutasa: Su aplicación a la sangre fetal humana. (3) Leong, M.M.L. & Fox, G.R. (1990) Methods Enzymol. 184, 442-451. Detección luminiscente de inmunodot y Western blot. (4) Yakunin, A.F. & Hellenbeck, P.C. (1998) Anal. Biochem. 258, 146-149. . Sistema de detección de luminol/yodofenol para inmunoblots Western.
