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La higromicina B pertenece a los antibióticos aminoglucósidos. Inhibe la traducción bacteriana al interactuar con el ARNr 16S. En eucariotas, el antibiótico inhibe el empalme de los intrones del grupo I al unirse a un motivo específico del ARN. Esto provoca errores de lectura y una inhibición de la translocación, probablemente por la liberación del peptidil-ARNt del sitio aceptor (3). En biología molecular, la higromicina B se utiliza para la selección de células resistentes a la higromicina tras la transformación con un plásmido que codifica la higromicina-fosfotransferasa (hph) de E. coli. Se ha desarrollado una serie de vectores que permiten la aplicación en diferentes organismos (hongos: Egelhoff, T.T. et al. (1989) Mol. Cell. Biol. 9, 1965-1968; Hamada, W. et al. (1994) Curr. Genet. 26, 251-255; células de mamíferos: Belt, P.B.G.M. et al. (1989) Gene 84, 407-417; Gäken, J. et al. (1992) BioTechniques 13, 32-34; Norman, J.A. et al. (1992) Mol. Pharmacol. 41, 53-59; Hubbard, S.C. et al. (1994) J. Biol. Chem. 269, 3717-3724; plantas: Dale, E.C. & Ow, D.W. (1991) Proc. Acad. Sci. USA 88, 10558-10562; Ma, H. et al. (1992) Gene 117, 161-167). Dependiendo del organismo y del tipo de célula, la concentración acitva oscila entre 20 μg/ml y 150 μg/ml. Por lo general, se aplica la concentración más alta (para las células HeLa, hasta 300 μg/ml). Se recomienda probar la concentración óptima. La cantidad de higromicina aplicada puede reducirse aumentando el pH del medio. A valores de pH más altos, las células son más sensibles. Las concentraciones de sal más bajas también ayudan a ahorrar higromicina (medio LB / agar LB con 5 en lugar de 10 g de NaCl por litro). Estabilidad: Las soluciones de higromicina B (por ejemplo, en tampón HEPES) son estables a +4°C durante al menos un año. Las informaciones sobre la estabilidad a 37°C van desde un mes hasta la recomendación de cambiar el medio cada tres días. En placas de agar la estabilidad es de aproximadamente 4 semanas. El envío se realiza a temperatura ambiente. La sustancia es sensible a altas concentraciones de ácidos. Los ácidos diluidos pueden ser tolerados por un corto tiempo. Precaución: La higromicina B es muy tóxica y probablemente cancerígena. No respirar el polvo y evitar el contacto con la piel. Llevar ropa de protección adecuada, guantes y protección ocular.
Literature
(1) Gritz, L. & Davies, J. (1983) Gene 25, 179-188. Resistencia a la higromicina B codificada por un plásmido: La secuencia del gen de la higromicina B fosfotransferasa. (2) Carrasco, L. & Vázquez, D. (1993) Inhibidores de la traducción viral en Antibióticos VI, página 279 (ed. F.E. Hahn) Springer-Verlag Berlin Heidelberg New York Tokyo. (3) Moazed, D. & Noller, H.F. (1987) Nature 327, 389-394. Interacción de los antibióticos con los sitios funcionales del ARNr 16S.
