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La glicerina es un componente de varios tampones, medios o reactivos en la investigación biológica. Se suministra como glicerina anhidra o al 87%, esta última con un 13% de agua. Ambas glicerinas son de la misma calidad, la del 87% tiene la ventaja de una menor viscosidad. La glicerina anhidra se puede pipetear con dificultad, especialmente a bajas temperaturas. La glicerina se esteriliza en autoclave (20 minutos, ciclo de líquido). En concentraciones superiores al 5% interfiere con los ensayos de proteínas y por encima del 40% a 280 nm, respectivamente. Después de la transfección con fosfato de calcio de células de mamíferos, se puede incluir un choque de glicerina o DMSO para mejorar la eficacia de la transfección (3, 4). Ambas sustancias son tóxicas para las células y hay que determinar el tiempo de incubación para cada tipo celular. En un desarrollo posterior del método del fosfato de calcio se recomienda añadir glicerol durante la incubación del ADN (5). Otra aplicación es la purificación de bacteriófagos l con glicerina como medio de separación (ref. 3 página 2.78).Congelación y almacenamiento de células eucariotas\N: La glicerina puede utilizarse en lugar del DMSO para la congelación de células eucariotas. Impide la formación de cristales de hielo y evita que se dañen las células. El glicerol se utiliza en una concentración del 10%. Es muy tóxico para las células. Por lo tanto, el "medio de congelación" debe enfriarse en hielo. El medio de congelación es el medio de cultivo "normal" con la adición de 10% de glicerol o 90% de suero más 10% de glicerol, lo que aumenta la viabilidad. La mayoría de los tipos de células no se transfieren directamente al nitrógeno líquido. Tienen que ser enfriadas lentamente (refrigerador, congelador a -70°C bien empaquetado, nitrógeno líquido). La descongelación de las células debe hacerse lo más rápidamente posible. Se recomienda lavar las células una vez con el medio antes de la siembra o cambiar el medio dos días después de la descongelación.Congelación y almacenamiento de las bacterias (2)\N-: Dependiendo de la técnica, se utiliza glicerina a una concentración que oscila entre el 15 y el 50%. Método I: Se añade un volumen de 0,15 de glicerina estéril a un volumen de 0,85 de cultivo líquido (por ejemplo, en medio LB). La mezcla se congela en un baño de etanol/hielo seco o en nitrógeno líquido. Almacenar el caldo congelado a -70°C. Método II: Se extrae una colonia de una placa de agar o se mezcla a fondo el pelet de un cultivo nocturno con tampón TM (10 mM Tris - HCl (pH 7,4), 10 mM MgSO₄, 50% de glicerina) y se congela como se ha descrito anteriormente.Para el recultivo de las bacterias no se debe descongelar el vial completo. Basta con rascar con un palillo esterilizado sobre la superficie del caldo congelado para inocular el medio de cultivo.
Literature
(1) Ogden, R.C. & Adams, D.A. (1987) Methods Enzymol. 152, 61-87. Resumen sobre la electroforesis en gel de ADN y ARN con fórmulas de tampones y soluciones. (2) Miller, H. (1987) Methods Enzymol. 152, 145-170. Preparación de ADN fago y plásmido para su almacenamiento como cultivo puro. (3) Sambrook, J., Fritsch, E.F. & Maniatis, T. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd Edition. Page 16.32-35 (Glycerol shock); Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, Nueva York. (4) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl. K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Page 9.1.7 (Glycerol shock); Suppl. 36. Greene Publishing & Wiley-Interscience, Nueva York. (5) Wilson, S.P. & Smith, L.A. (1997) Anal. Biochem. 246, 148-150. La adición de glicerina durante la incubación del ADN aumenta la eficacia de la transfección.
