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La digitonina es un glucósido esteroide de Digitalis purpurea y es capaz de permeabilizar las membranas plasmáticas y formar complejos con el colesterol (1, 3). Se trata de un detergente no iónico que suele utilizarse para solubilizar proteínas unidas a la membrana. A concentraciones entre 10 - 100 μg/ml, sólo se permeabiliza la membrana plasmática rica en colesterol, pero no la de los orgánulos (3). La digitonina es adecuada, por ejemplo, para aislar el receptor opioide de las membranas del cerebro de la rata sin perder la capacidad de unirse a diversos agonistas/antagonistas (2). La digitonina es poco soluble en agua, cloroformo o éter. La solubilidad en etanol absoluto es 1 g/57 ml o 1 g/220 ml en etanol al 95%. Pueden prepararse soluciones madre de digitonina (por ejemplo, 10% p/v o 1 mg/ml) en agua o tampón (por ejemplo, pH 7,2 - 7,5) calentando (95 - 100°C) o agitando en vórtex hasta que la solución se vuelva clara. La digitonina que precipita tras el enfriamiento (+4°C) se elimina por filtración (1, 2, 4). El DMSO también es adecuado como disolvente (solución madre de 20 mg/ml). Las soluciones madre de digitonina se conservan a +4°C durante no más de una semana. Pueden producirse diferencias en la capacidad de permeabilizar las membranas de un lote a otro con cualquier proveedor (3).
Literature
(1) Scallen T.J. & Dietert, S.E. (1969) J. Cell Biol. 40, 802-813. Retención Cuantitativa del Colesterol en el Hígado de Ratón preparado para Microscopía Electrónica por Fijación en una Solución de Aldehído que contiene Digitonina. (2) Demoliou-Mason, C.D. & Barnard, E.A. (1984) FEBS Lett. 170, 378-382. Solubilización en alto rendimiento de receptores opioides que conservan sitios de unión delta, mu y kappa de alta afinidad. (3) Mooney, R.A. (1988) Methods Enzymol. 159, 193-202. Uso de adipocitos permeabilizados con digitonina para estudios de AMPc. (4) Kiefer, H. et al. (1996) Biochemistry 35, 16077-16084. Expresión de un receptor olfativo en E. coli: Purificación, reconstitución y unión a ligando.
