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El G418 bloquea la síntesis de proteínas en las células de mamíferos al interferir con la función ribosomal. Es un antibiótico aminoglucósido, de estructura similar a la neomicina, la gentamicina y la kanamicina. El disulfato de geneticina se utiliza para la selección de células transformadas de forma estable, que han incorporado el gen de resistencia a la neomicina (fosfotransferasa de aminoglucósidos) derivado de los transposones Tn 5 y Tn 601. Como este antibiótico es tóxico para muchas células, debe determinarse la concentración óptima para cada tipo de célula. En general, esta concentración varía de 50 a 1000 μg/ml. A una concentración de 500 μg/ml, el 70% de las células HepG2 mueren tras una semana de incubación y el 100% deja de crecer (2). Diferentes lotes de G418 pueden tener diferentes potencias. Por lo tanto, se recomienda comprar mayor cantidad de un mismo lote para estandarizar las condiciones de selección. Las células se dividen una o dos veces en presencia de una dosis letal de G418, por lo que los efectos del antibiótico tardan varios días en hacerse evidentes (3). Estabilidad y solubilidad: El G418 es estable a +4°C. Las soluciones se almacenan a -20°C y son estables hasta 2 años. Las soluciones madre de G418 deben prepararse en una solución fuertemente tamponada (por ejemplo HEPES 100 mM, pH 7,3; ref. 3), de modo que la adición del antibiótico no altere el pH del medio. Las soluciones madre pueden prepararse a una concentración de 50 mg/ml.
Literature
(1) Liscovitch, M. et al. (1991) Biochem. J. 279, 319-321. Inhibición de la actividad de la fosfolipasa D neuronal por los antibióticos aminoglucósidos. (2) Kumar, S. et al. (1994) Biochem. Mol. Biol. Int. 32, 1059-1066. Evaluación comparativa de tres procedimientos de transfección según la resistencia a G418 conferida a las células HEG2. (3) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) 2000. Currrent Protocols in Molecular Biology. Página 9.5.7 Suppl. 39 John Wiley & Sons, Nueva York.
