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El ditiotreitol (DTT) es, al igual que el β-mercaptoetanol, un reactivo reductor de las proteínas y protege los residuos de cisteína contra la oxidación. Puede sustituir al β-mercaptoetanol en casi todos los experimentos a concentraciones de tres a cuatro veces menores. El DTT es menos tóxico, su olor es menos intenso y no forma disulfuros mixtos como el β-mercaptoetanol. El DTT es soluble en agua y las soluciones madre se preparan a 1 M. Guardar la solución alícuota a -20°C y protegerla del calor durante el experimento. No elegir una concentración demasiado baja para el experimento, ya que se oxida fácilmente con el aire. La concentración de trabajo oscila entre 0,1 y 1 mM, pero la preparación de extractos de plantas ( 5 mM; ref. 4) o para el "aislamiento in situ a gran escala" de proteínas después de la fermentación (10 mM; ref. 5) requieren concentraciones más altas. Para la reducción completa de los disulfuros, la concentración puede ser significativamente mayor (3).
Literature
(1) Cleland, W.W. (1964) Biochemistry 3, 480-482. Ditiotreitol, un nuevo reactivo protector de los grupos SH. (2) Zahler, W.L. & Cleland, W.W. (1968) J. Biol. Chem. 243, 716-719. Un ensayo específico y sensible para disulfuros. (3) Jocelyn, P.C. (1987) Methods Enzymol. 143, 246-256. Reducción química de disulfuros. (4) Gegenheimer, P. (1990) Methods Enzymol. 182, 174-193. Preparación de extractos de plantas. (5) Hart, R.A. et al. (1994) Bio/Technology 12, 1113-1117. 'Large scale in situ isolation' o periplasmatic IGF-I from E. coli.
