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X-Gal ist Substrat der β-Galactosidase, die durch Spaltung des Substrates 5-Brom-4-chlor-3-indoxyl (X) freisetzt. Das enzymatisch abgespaltene Indoxyl wird zum unlöslichen Indigo oxidiert. X-Gal findet Verwendung in der Identifizierung von lacZ\+ Bakterien, speziell zum Nachweis von β-Galactosidase, die von rekombinanten Vektoren exprimiert wird. Als Stammlösung kann z.B. eine 20 mg/ml X-Gal-Lösung in Dimethylformamid angesetzt werden. Für die Verwendung in LB/Amp. - Platten wird diese Stammlösung 1 : 1000 (Endkonz. 20 μg/ml) oder 1 : 500 (Endkonz. 40 μg/ml) verdünnt. Das erhitzte Medium sollte dabei auf ~50°C heruntergekühlt sein.Die Menge an eingesetztem X-Gal kann reduziert werden, wenn eine X-Gal-Lösung in DMF auf die Agar-Platten (bereits mit Bakterienkolonien!) aufgesprüht wird (3).
Literature
(1) Lojda, Z. et al. (1973) Histochemie 34, 361-369Synthetische Substrate für den histochemischen Nachweis von Disacchariden. (2) Lin, W.-c. et al. (1990) Cancer Res. 50, 2808-2817. Das bakterielle lacZ-Gene als Marker für den Nachweis der Entstehung von Micrometastasen während der Tumorprogression. (3) Maas, S. (1999) BioTechniques 27, 1126-1128. Effiziente und schnelle Prozedur für die blau-weiß-Selektion rekombinanter bakterieller Klone.
