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Die gleichzeitige Aufreinigung von RNA, DNA und Proteinen aus einer biologischen Probe wurde von Chomczynski entwickelt (1) und verschiedentlich verbessert. Chomczynskis Verfahren beruht auf der Isolierung von nichtdegradierten Nukleinsäuren (RNA und DNA) mit Guanidiniumsalzen und Phenol (zum Beispiel Ref. 2-5). Diese Methode kann für sehr kleine bis große Proben, gerade auch in großen Stückzahlen, angewendet werden.TRItidy G™ ist ein gebrauchsfertiges Reagenz, basierend auf der Chomczynski-Methode (1), mit weiteren Modifikationen zur Verbesserung der Reinheit der RNA, DNA und Proteinen. Zunächst wird die RNA bei der sauren GuaSCN/Phenol-Extraktion selektiv in der wässrigen Phase zurückgehalten, während DNA und Proteine in der organischen Phase bzw. Interphase verbleiben (6). Durch Ethanol-Fällung der DNA aus der Interphase/organischen Phase, müssen nur noch die Proteine aus der restlichen organischen Phase isoliert werden.
Literature
(1) Chomczynski, P. (1993) BioTechniques 15, 532-537. Simultane Isolierung von RNA, DNA und Proteinen aus Zellen und Geweben. (2) Cox, R.A. (1968) Methods Enzymol. 12 Part B, [103a] 120-129. Der Gebrauch von Guanidiniumchlorid in der Isolierung von Nukleinsäuren. (3) Kirby, K.S. (1968) Methods Enzymol. 12 Part B, [98] 87-99. Isolierung von Nukleinsäuren mit phenolischen Lösungsmitteln. (4) MacDonald, R.J. et al. (1987) Methods Enzymol. 152, 219-227. Isolierung von RNA mit Guanidiniumsalzen. (5) Feramisco, J.R. et al. (1982) J. Biol. Chem. 257, 11024-11031. Modifikation der GTC-Methode zur RNA-Isolierung nach Chirgwin. (6) Wallace, D.M. (1987) Methods Enzymol. 152, 33-41. Phenol-Extraktion im großen und kleinen Maßstab. (7) Chomczynski, P. & Mackey, K. (1995) Anal. Biochem. 225, 163-164. Ersatz von Chloroform durch Bromchlorpropan in der "single-step"-Methode zur RNA-Isolierung. (8) Chomczynski, P. & Mackey, K. (1995) BioTechniques 19, 942-945. Modifikation der TRI Reagent™ Methode zur RNA-Isolierung aus Polysaccharid- und Proteoglycan-reichen Quellen. (9) Monstein, H.-J. et al. (1995) BioTechniques 19, 340-344. RNA-Extraktion aus dem gastrointestinalen Trakt und Pankreas durch eine modifizierte Chomczynski & Sacchi-Methode.
