Comments
Bei der Isolierung von Nukleinsäuren aus pflanzlichem Material, ist die hohe Konzentration an phenolischen Substanzen ein Problem. Diese würden in späteren Arbeitsschritten Enzyme hemmen und können durch Zugabe von 1 % Polyvinylpyrrolidon K30 (v/v; Endkonzentration) während der Gewebehomogenisation absorbiert werden (Ref. 1 Seite 2.3.4). Es wird empfohlen die Stammlösung (20 %) jedesmal frisch anzusetzen (2).Positiv geladene Nylonmembranen weisen in Immunoblotts häufig einen hohen unspezifischen Hintergrund auf. Daher müssen die Oberflächen blockiert werden, im Fall der positiv geladenen Nylonmembranen sehr stringent. Es kann 6 % (w/v) Casein in Verbindung mit 1 % (v/v) Polyvinylpyrrolidon (PVP) eingesetzt werden. Beide Substanzen werden unter Rühren (5 Min.) in 65°C warmen TTBS-Puffer gelöst.
Literature
(1) Ausubel, F.A., Brent, R., Kingston, R.E., Moore, D.D., Seidman, J.G., Smith, J.A. & Struhl, K. (eds.) (1995) Current Protocols in Molecular Biology. Seite 2.3.4 (Suppl. 27) und Seite 10.8.15 (Suppl. 39). Greene Publishing & Wiley-Interscience, New York. (2) John, M.E. (1992) Nucleic Acids Res. 20, 2381. Isolierung von RNA und DNA aus Pflanzen mit hohem Polyphenol-Gehalt.
