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Eine wichtige Funktion der Ascorbinsäure (Vitamin C) im Organismus ist der Schutz von Fe2\+ in Oxygenasen vor der Oxidation zu Fe3\+ oder als reduzierendes Agens z.B. in Hydroxylierungsreaktionen wie bei der Umwandlung von Prolin zu Hydroxyprolin im Collagen. Durch Luftsauerstoff wird Ascorbinsäure in wässrigen Lösungen irreversibel zu L-Diketogulonsäure und anderen biologisch inaktiven Substanzen oxidiert.Bei der Herstellung von pflanzlichen Zell- und Gewebeextrakten müssen dem Homogenisierungspuffer in der Regel hohe Konzentrationen an Reduktionsmitteln zugesetzt werden. Besonders bei der Isolierung von Chloroplasten werden die physiologischen Reduktionsmittel Ascorbat und Glutathion eingesetzt (3, 4). Die Ascorbat-Vorratslösung (100X - Konzentrat) nach Ref. 3 setzt sich aus 50 mM HEPES-NaOH (pH 7,6) mit 0,5 M Ascorbat zusammen und wird bei -20°C gelagert. Die Arbeitskonzentration beträgt 2 mM (4) bis 5 mM (3) Ascorbat.
Literature
(1) Kanfer, J.N. & Spielvogel, C.H. (1973) Biochim. Biophys. Acta 327, 405-411. Hemmung der β-N-Acetylhexosaminidase durch Laktone. (2) Omaye, S.T. et al. (1979) Methods Enzymol. 62, 3-11. Ausgewählte Methoden zum Nachweis von Ascorbinsäure in tierische Zellen, Geweben und Flüssigkeiten. (3) Gegenheimer, P. (1990) Methods Enzymol. 182, 174-193. Preparation von Extrakten aus Pflanzen. (4) Hager-Braun, C. et al. (1995) Biochemistry 34, 9617-9624. Untersuchung des photosynthetischen Reaktionszentrums P840 von Chlorobium.
